精準每一峰”——安捷倫HPLC標準操作的流程
安捷倫HPLC使用過程詳解
一、開機前準備
流動相處理?
根據(jù)樣品性質(zhì)選擇流動相（如甲醇-水、乙腈-緩沖鹽等），需使用HPLC級溶劑，水相需超純水或三天內(nèi)更換的娃哈哈純凈水。
流動相需用0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣15-30分鐘以去除氣泡。
溶劑瓶中加入10%異丙醇水溶液（用于在線沖洗泵頭），防止隔夜流動相損傷色譜柱。
色譜柱安裝?
選擇與樣品匹配的色譜柱（如C18反相柱），按箭頭方向連接至柱溫箱，確保管路無死體積。
長期未使用的色譜柱需用高有機相（如95%甲醇）保存，避免純水導致柱效下降。
系統(tǒng)檢查?
確認廢液瓶容量充足，洗針液（甲醇/乙腈）充足，管路無泄漏或堵塞。
二、開機與系統(tǒng)平衡
設備啟動?
依次開啟四元泵→進樣器→柱溫箱→檢測器電源，待自檢完成后進入化學工作站。
雙擊“Instrument1Online”圖標聯(lián)機，設置泵流速為5mL/min，切換溶劑通道排空氣泡（壓力＞10bar需更換排氣閥過濾白頭）。
系統(tǒng)平衡?
以梯度程序（如甲醇比例從0%升至10%）或等度程序（如95%甲醇）沖洗系統(tǒng)30分鐘，基線平穩(wěn)后記錄壓力值。
梯度洗脫時需設置時間表，避免鹽溶液與有機溶劑直接混合導致沉淀。
三、安捷倫HPLC方法編輯與運行
方法創(chuàng)建?
在化學工作站中新建方法，設置泵參數(shù)（流速、梯度）、柱溫（默認30-40℃）、檢測器波長（如254nm）及信號采集時間。
積分參數(shù)需根據(jù)峰形調(diào)整斜率靈敏度、峰寬等，保存方法后調(diào)用至序列模板。
樣品運行?
單針運行：選擇樣品瓶位置，填寫樣品名稱，設置進樣體積（如10μL），啟動分析。
序列運行：批量導入樣品信息，設置自動洗針功能，避免殘留污染。
四、數(shù)據(jù)采集與分析
數(shù)據(jù)優(yōu)化?
調(diào)整信號范圍（自動量程或自定義），優(yōu)化基線噪聲，使用積分事件處理復雜峰形。
校正表功能支持自動計算峰面積百分比或外標法定量。
報告生成?
選擇報告模板（簡單/完整），導出PDF或Excel格式，支持自定義注釋和色譜圖標注。
五、關(guān)機與維護
系統(tǒng)沖洗?
分析結(jié)束后，用95%水沖洗30分鐘，再以100%有機相（甲醇/乙腈）沖洗20分鐘，保護色譜柱。
含緩沖鹽的流動相需額外用純水沖洗45分鐘以上，防止鹽結(jié)晶堵塞管路。
儀器維護?
每日檢查泵頭密封圈（推薦聚四氟乙烯材質(zhì)），每月更換Seal-wash溶劑。
長期停用時，色譜柱需密封保存于高有機相中，避免純水環(huán)境。
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